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分析pcr仪扩增产物电泳分析时没有条带

发布时间:2026/1/1516

产生pcr仪扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅的原因有以下几种:

1、反应体系是PCR的反应体系而不是RT-PCR的反应体系,这是常见的原因;

2、与反应起始时RNA的总量及纯度有关:建议在试验中加入对照RNA;

3、*链的反应产物在进行PCR扩增时,在总的反应体系中的含量不要超过1/10:建议用Oligo(dT)或随机引物代替基因特异性引物(GSP)用于*链合成。

4、由于RNA模板存在二级结构,如环状结果,有可能导致GSP无法与模板退火;或SSⅡ反转录酶无法从此引物进行有效延伸。

5、目的mRNA中含有强的转录中止位点,可以试用以下方法解决:

①将*链的反应温度提高至50℃。

②使用随机六聚体代替Oligo(dT)进行*链反应。

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