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BD C6流式细胞仪测定细胞周期的步骤

发布时间:2026/1/165

BD C6流式细胞仪测定细胞周期的步骤:

1)将细胞以1×106接种于60mm培养板,80%汇合后转染,或者按照计划的方案处理。
2)24小时后在新鲜培养液中加入适当的抗生素(真核表达载体上的抗性标记)进行培养(该步可选)。
3)48-72小时后用消化(或者用细胞刮子)收集细胞,PBS(加入FBS使终浓度为1-3%)洗两遍,弃上清,加入1ml70%预冷乙醇中,吹打均匀,-20℃或4℃固定12小时以上。
4)PBS(加入FBS使终浓度为1-3%)洗涤去乙醇,1000rpm,5min,洗两遍。
5)0.5mlPBS重悬细胞,加入PI和RNaseA至终浓度50?g/ml,37℃(或室温下)温浴30min。
6)用BD C6流式细胞仪测定周期。
PI:碘化丙啶,以PBS配成1mg/ml,4℃保存。
RNaseA:10mg/ml
应用:通过流式细胞仪分析各时期的细胞百分数,可检测细胞的增殖、凋亡。

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